[目的要求]1、學習和掌握用紫外分光光度法定性的原理和方法。2、學習紫外分光光度計的使用方法，了解基本結(jié)構(gòu)，掌握紫外分光光度法定量的原理和方法。

[基本原理]

紫外分光光度法其比較重要的用途是用于有機化合物的定性和定量分析方面。因為很多有機化合物及其衍生物在紫外波段有強的吸收光譜，可以把未知試樣的紫外吸收光譜圖和標準試樣(或與標準準圖譜)比較，當濃度和溶劑相同時，若兩者的譜圖相同（峰、極小值和拐點的λ相同），而且未知樣品大體已知時，可以說明它們是同一個化合物。但是在紫外和可見光區(qū)域，這些特征的峰、極小值和拐點的數(shù)目往往是有限的，且紫外吸收光譜的吸收峰還較寬，兩種不同的化合物可能有相同的紫外吸收光譜，對于*未知的有機化合物，有時可以通過改換溶劑和適當?shù)幕瘜W處理之后所得的未知標準光譜對照，不僅比較λ，還要比較它們的λmax和A，來進一步確證，甚至還要進一步借助紅外、核磁和質(zhì)譜等手段才能后得出結(jié)論。    紫外分光光度法進行定量分析是有快速，靈敏度高及分析混合物中各組份有時不需要事前分離，不需要顯色劑，因而不受顯色劑溫度及顯色時間等因素的影響，操作簡便等優(yōu)點。目前廣泛用于微量或痕量分析中。但有一個局限性，就是待測試樣必須在紫外區(qū)有吸收并且在測試濃度范圍服從比耳定律才行。    利用紫外光度法測定試樣中單組份含量時，通常先測定物質(zhì)的吸收光譜，然后選擇大吸收峰的波長進行測定。其原理與一般比色分析相同。可用標準工作曲線法。如果通過實驗證明，在測定條件下符合比耳定律，也可以不用標準曲線而與標準品的已知濃度溶液比較求出未知樣品濃度。[儀器與試劑]

751G型，752型及53WB型紫外可見分光光度計；1 cm石英比色皿未知物1—環(huán)己烷溶液；未知物2—環(huán)己烷溶液；未知物3—乙醇溶液；未知物4—乙醇溶液；萘的標準溶液：（1）1 mg/mL的標準萘溶液：準確稱取50毫克色譜純的萘于小燒杯中，以無水乙醇溶液溶解后定量移入50毫升容量瓶中，以無水乙醇稀至刻度，搖勻；（2）10 μg/mL的標準萘溶液，由1 mg/mL萘標液準確稀釋100倍即成；（3）1 μg/mL的標準萘溶液：由10 μg/mL萘標液準確稀釋10倍即成。

[實驗步驟]

1、以試樣的溶劑為參比對未知芳香化合物的溶液測定，其紫外吸收光譜波長一般從220 nm—300 nm。間隔自選（一般間隔1—2 nm）。    2、繪制出吸收曲線后從“Ultraiolet Spectra of Aromatic Compounds”（芳香族  化合物的紫外光譜）一書中的標準譜圖對照查出屬于何種有機化合物。    3、以95%乙醇為參比溶液，用1cm石英比色皿對標準萘—乙醇溶液測定紫外吸收光譜，波段從210 nm—230 nm，只要找出大吸收峰位置即可。    4、在儀器上以大吸收峰測定已知濃度的標準溶液。    （1）用10 mL帶塞比色管6支，配制濃度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5 μg/mL的標準溶液系列各10 mL。    （2）在分光光度計上以大吸收峰波長（～220 nm）測定標準系列的吸光度，濃度從低到高，記錄吸收值。    5、對未知樣品進行測定。    對幾個未知樣品中的萘含量進行測定時的條件應與標準系列一致。試樣中含量高，可用乙醇稀釋后測定。

[結(jié)果處理]

式中：C標、C樣—分別為標準液和試樣中萘的濃度；

      A標、A樣—分別為標準液和試樣液的吸光度；

      W樣—試樣重。

[注意事項]  （1）測定過程中比色皿應加蓋子，并防止蓋子相互污染。  （2）讀數(shù)后立即關(guān)閉光閘，保護光電管。  （3）小心不要打破石英比色皿；比色皿光學玻璃面要用揩鏡紙擦。